Epongez délicatement la surface pour enlever tout exsudat
Déposez successivement la surface coupée de la lésion sur une ou deux coupes
Dans le cas de tumeur trop ferme (collagène trop abondant), il est préférable de procéder à un grattage.
A.3. Le grattage
Il se fait avec une lame de scalpel puis étalement du matériel collecté sur une lame. La lame de scalpel doit être tenue verticalement par rapport à la surface à prélever ou légèrement penchée. Effectuez le grattage par des mouvements allant vers vous.
Cette technique est surtout utilisée en dermatologie pour la recherche d’organismes infectieux. Vous pouvez gratter la surface de coupe d’une tumeur non fixée mais au préalable légèrement épongée pour éliminer l’excédent de liquide. N’utilisez pas le grattage comme méthode de prélèvement d’un nodule intradermique, même ulcéré. Vous aurez surtout à la cytologie l’image du lit d’ulcère et peu de chance d’avoir des cellules néoplasiques. De plus vous risquez de confondre une atypie réactionnelle cicatricielle avec une atypie néoplasique. Il vaut toujours mieux ponctionner quand il y a effet de masse.
Pour amincir le frottis, posez en surface de celui-ci, une autre lame et tirez-les à part en les faisant glisser sans pression sur leur surface de contact.
A.4. L'écouvillon
Pour des organes tels que le nez, les organes génitaux, l'anus ...
Il faut éviter une contamination de l’écouvillon jusqu’à la zone à atteindre. On emploie un écouvillon propre ou stérile (stérile n’est pas absolument nécessaire pour un examen cytologique) que l’on peut au préalable humidifier avec du sérum physiologique si l’organe à prélever est sec. L'étalement se fait en tournant délicatement, sans pression, l'écouvillon sur la coupe.
A.5. Pour les liquides
Divisez immédiatement après le prélèvement l’échantillon en autant de volumes que de types d’analyses (chimie, bactério, cyto...) nécessaires.
Effectuez deux étalements directs et conservez le reste du liquide au frigo.
Si le liquide est peu cellularisé, aqueux, l’idéal est de le centrifuger 5 minutes à 1500 tours/minute et d’étaler le culot.
Dans le doute envoyez toujours des étalements directs + des étalements après centrifugation. (Précisez toujours si vous avez centrifugé, la densité cellulaire est un critère cytologique très important !).
Si vous n’avez pas de centrifugeuse, l’idéal est l’envoi aussi du reste du liquide non fixé mais il doit parvenir alors au labo dans le délai le plus bref et être conservé au frigo entre temps.
Ces liquides peuvent être fixés. Si le délai entre le prélèvement et l’étalement risque d’être trop long ou s’il fait très chaud (en voiture), fixez au préalable le liquide à raison d'un même volume de solution pour le volume du liquide obtenu (voir fixation). A ce moment, indiquez clairement sur le protocole et le flacon que ce matériel est fixé et destiné à la cytologie pour éviter toute confusion lors de sa réception.
A.2. L'empreinte
Elle s’utilise surtout en dermatologie (voir section méthode de prélèvement en dermatologie) pour la peau (pustule, ulcère, organisme...) et tumeur (surface de coupe). Elle peut se faire avant que la tumeur ne soit fixée dans le formol. Une surface fraîche de la tumeur est délicatement posée sur un papier absorbant afin d'éliminer le liquide trop abondant puis délicatement appliquée plusieurs fois sur une ou plusieurs lames.
! Avant de retirer l'aiguille, relâchez tout doucement le piston. Toute aspiration d’air à travers l’aiguille induira une destruction des cellules.
Certaines masses requièrent une ponction plus vigoureuse comme si vous pompiez un pneu.
Arrêtez dès que du matériel arrive au goulot (pour éviter la dilution), ce qui est dans une aiguille suffit.
Pour récupérer le matériel collecté, séparez l'aiguille de la seringue, remplissez la seringue d'un peu d'air, replacez l'aiguille sur la seringue et déposez délicatement le contenu de l’aiguille sur une lame. Etalez ensuite le matériel obtenu en suivant les techniques décrites dans le chapitre de l’étalement, le plus rapidement possible.
A.1.2.Cytoponction sans aspiration
Dans cette méthode, on n’induit pas d’aspiration avec une seringue. La récolte cellulaire se fait surtout par dissection des tissus. Soit on travaille avec l’aiguille à nu (on sent mieux ainsi la consistance de la masse) soit on monte une seringue sur l’aiguille, contenant déjà de l’air pour l’expulsion des cellules après la ponction. Promenez l’aiguille au sein de la tumeur par des mouvements de va-et-vient multidirectionnels, d’amplitude supérieure à 5 mm et rapidement (la rapidité du mouvement induit la dissection des cellules). Plus l’amplitude est grande, plus le trajet est long, plus on obtient du matériel. Expulsez ensuite le contenu de l’aiguille avec une seringue contenant de l’air.
Chaque cytologiste a sa méthode de prédilection. C’est avec l’expérience que l’on adopte l’une plus que l’autre ou que l’on varie en fonction des tissus ponctionnés.
A.1.3. Méthode pour les petites masses (< 5-8 mm) intra-épithéliales et dermiques
Il est possible d’obtenir des cellules dans les petites masses superficielles en enfonçant le biseau d’une aiguille à long biseau, le biseau vers le haut, au sein de la masse et d’arracher les cellules en induisant une traction vers le haut. On pose ensuite les cellules obtenues en les expulsant avec une seringue puis on étale selon les méthodes classiques.
PRELEVEMENTS CYTOLOGIQUES
A. METHODES DE PRELEVEMENT
Les méthodes de prélèvements varient en fonction de l'organe ou du matériel à analyser.
Matériel : l’idéal est d’acheter des lames nettoyées, avec une extrémité opacifiée. Il n’est pas nécessaire d’avoir des bords érodés par contre, ce type de lame ne s’adapte pas à tout microscope.
A.1. La cytoponction
Il s'agit de la méthode plus fréquente. Elle se fait à l'aiguille (tumeur, liquide d'accumulation, abcès).
L'équipement est simple et consiste en une aiguille fine, maximum 22-ga de longueur, permettant une bonne pénétration de la tumeur et une seringue de 6 ml au moins pour obtenir une bonne dépression dans l’aiguille (pour la méthode avec aspiration). En fait plus la masse est molle, plus l’aiguille devra être fine et la seringue petite.
Il y a deux méthodes de cytoponction : une avec aspiration, une sans aspiration.
A.1.1 Cytoponction avec aspiration
L'aiguille est enfoncée dans la masse, le ganglion… Une fois au sein du tissu, provoquez à l'aide de la seringue, une dépression dans l'aiguille en tirant sur le piston. Tout en maintenant cette traction, promenez par un mouvement de va-et-vient multidirectionnel l’aiguille au sein de la tumeur pour avoir un matériel le plus représentatif possible du tissu prélevé. On recommande d’effectuer des trajectoires de plus de 5 mm et rapidement. Plus l’amplitude est grande, plus on obtient du matériel.
La rapidité du mouvement dissèque plus facilement les cellules.
anatomie pathologique vétérinaire pour animaux de compagnie
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